小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)在發(fā)育生物學(xué)體外實(shí)驗(yàn)研究中已被廣泛應(yīng)用

更新時(shí)間：2022-11-27 | 點(diǎn)擊率：980

海馬椎體神經(jīng)元是海馬區(qū)的主要成分，主要功能是參與近期記憶、情緒及內(nèi)臟功能調(diào)節(jié)、是老年性癡呆、癲癇等疾病的主要病灶之一。小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)是研究神經(jīng)細(xì)胞生物學(xué)特性和外源干擾因素作用(細(xì)胞因子)的有效細(xì)胞模型，其在神經(jīng)生物學(xué)，發(fā)育生物學(xué)體外實(shí)驗(yàn)研究中已被廣泛應(yīng)用。

　　一、傳代培養(yǎng)

　　傳代前準(zhǔn)備--胰蛋白酶消化--吹打分散細(xì)胞--分裝稀釋細(xì)胞--繼續(xù)培養(yǎng)

　　1)將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊的培養(yǎng)液棄掉，然后用D-Hanks液洗兩次，(一定要洗干凈，以免影響胰酶的消化作用)。

　　2)加入0.25%胰酶-EDTA消化，25cm培養(yǎng)瓶加0.4ml，37度消化5min，鏡下看到細(xì)胞變圓，間隙增大。

　　3)立即加含10%FCS的培養(yǎng)液終止消化，用細(xì)胞刮刀輕刮，注意，這時(shí)候用吸管吹不下來(lái)，但是刮刀卻很容易刮下來(lái)，而且對(duì)細(xì)胞的損傷極小。

　　4)離心，棄上清，加新的培養(yǎng)液(10%FCS)，小心吹勻，分裝入新的培養(yǎng)瓶。

　　二、注意事項(xiàng)

　　1、不要輕易改變培養(yǎng)液，我曾經(jīng)把MEM換成1640后，細(xì)胞傳幾代后莫名其妙死亡。

　　2、如果想節(jié)省消化液，上面第2步可換成3-5mlDPBS洗，主要是去除培養(yǎng)瓶里會(huì)影響消化液作用的成分。

　　3、自配消化液一定要調(diào)PH（=7.8-8）值，并且注意分裝，-20度保存，避免反復(fù)凍融，用前37度預(yù)熱，消化較好較快。

　　4、嚴(yán)格的無(wú)菌操作。

　　5、適度消化：消化的時(shí)間受消化液的種類、配制時(shí)間、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響，消化過(guò)程中應(yīng)該注意培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)的變化，一旦胞質(zhì)回縮，連接變松散，或有成片浮起的跡象就要立即終止消化。